植物ELISA試劑盒的基本原理是:
①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。
植物ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)操作步驟如下:
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可在小試管中進(jìn)行稀釋。
2、加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7、溫育:操作同3。
8、洗滌:操作同5。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。